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行業(yè)動(dòng)態(tài)

切向流系統(tǒng)在蛋白質(zhì)濃縮與緩沖液置換中的應(yīng)用

添加時(shí)間:2025-04-16 11:02:45   瀏覽次數(shù):408  

蛋白質(zhì)濃縮與緩沖液置換

應(yīng)用場(chǎng)景
從低濃度蛋白溶液(如細(xì)胞培養(yǎng)上清或粗提液)中去除小分子雜質(zhì)(鹽離子、溶劑等),同時(shí)濃縮目標(biāo)蛋白至所需濃度。

操作流程

  • ?膜包選擇:根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量選擇截留分子量(MWCO)合適的超濾膜(例如,30 kDa膜用于濃縮150 kDa的抗體)。
  • ?系統(tǒng)組裝:組裝TFF系統(tǒng)(蠕動(dòng)泵、膜包、壓力表、儲(chǔ)液罐),用純水預(yù)沖洗膜包以去除保存劑。
  • ?循環(huán)濃縮:將蛋白溶液泵入系統(tǒng),調(diào)節(jié)蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速(例如200 RPM)和背壓閥,控制跨膜壓力(TMP)在1~3 bar。
  • ?緩沖液置換:在濃縮過(guò)程中持續(xù)添加新緩沖液(透析模式),置換原液中的鹽或雜質(zhì)。
  • ?終點(diǎn)判定:通過(guò)UV監(jiān)測(cè)(A280吸光度)或體積減少比例(如濃縮10倍)確定終點(diǎn)。

優(yōu)勢(shì)

  • 避免傳統(tǒng)透析法的長(zhǎng)時(shí)間等待和低效問(wèn)題。
  • 可處理大體積樣品(如1 L→10 mL),且活性回收率>90%。

注意事項(xiàng)

  • 避免過(guò)度濃縮導(dǎo)致蛋白聚集(控制TMP不超過(guò)膜耐受極限)。
  • 操作后立即用0.1 M NaOH清洗膜包,防止蛋白殘留污染。
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